Plásmido CRISPR de Activación (h) hnRNP C1/C2: sc-400993-ACT

HNRNPC codifica la ribonucleoproteína nuclear heterogénea C1/C2, una proteína nuclear abundante de unión a ARN que se ensambla sobre el pre-ARNm naciente para regular la selección de sitios de empalme, la fidelidad del empalme alternativo y la maduración del ARNm. hnRNP C1/C2 participa en el procesamiento de ARN cotranscripcional, influye en la exportación y estabilidad del ARNm y ayuda a mantener la integridad del transcriptoma al coordinar la formación de complejos ribonucleoproteicos. A través de estas funciones, se integra con programas centrales de expresión génica, incluidas las vías del metabolismo del ARN y respuestas transcripcionales vinculadas al ciclo celular. La desregulación de la expresión de HNRNPC o de la actividad de hnRNP C1/C2 se ha asociado con cambios en los patrones de empalme y con un procesamiento aberrante del ARN observado en múltiples contextos patológicos, lo que respalda su uso como nodo mecanístico en estudios de fenotipos impulsados por ARN.

hnRNP C1/C2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HNRNPC sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

hnRNP C1/C2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HNRNPC en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HNRNPC, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de hnRNP C1/C2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HNRNPC y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de hnRNP C1/C2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía hnRNP C1/C2 en células tumorales con expresión de HNRNPC silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.