Plasmide CRISPR d'Activation (m) hnRNP A2/B1: sc-424702-ACT

La protéine murine Hnrnpa2b1 code la protéine de liaison à l’ARN hnRNP A2/B1, un composant central des complexes de ribonucléoprotéines nucléaires hétérogènes qui coordonne l’épissage du pré‑ARNm, l’export de l’ARNm, sa stabilité et sa traduction. hnRNP A2/B1 participe à la régulation génique co‑ et post‑transcriptionnelle via des interactions avec des facteurs du spliceosome et le couplage de la transcription au traitement de l’ARN, influençant des programmes d’état cellulaire tels que la prolifération et la différenciation. Elle a également été impliquée dans la biologie des granules d’ARN et les réponses au stress, reliant le métabolisme de l’ARN à la protéostasie et à la compartimentation subcellulaire. Le dérèglement du traitement de l’ARN dépendant de hnRNP A2/B1 et de la sélection d’isoformes est fréquemment étudié dans des contextes de neurodégénérescence, de reprogrammation oncogénique et de signalisation inflammatoire, où une régulation anormale de l’ARN contribue à des phénotypes associés aux maladies.

hnRNP A2/B1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Hnrnpa2b1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

hnRNP A2/B1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Hnrnpa2b1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Hnrnpa2b1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de hnRNP A2/B1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Hnrnpa2b1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de hnRNP A2/B1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie hnRNP A2/B1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Hnrnpa2b1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.