Plasmide CRISPR/Cas9 KO hnRNP A/B (m): sc-420896

Présentation

Hnrnpab code la ribonucléoprotéine nucléaire hétérogène A/B (hnRNP A/B) de la souris, une protéine liant l’ARN qui s’associe aux transcrits naissants afin de réguler l’épissage du pré‑ARNm, la sélection alternative d’exons, la stabilité de l’ARNm et le transport nucléocytoplasmique. hnRNP A/B participe à la régulation génique co‑ et post‑transcriptionnelle au sein de complexes ribonucléoprotéiques et contribue à coordonner la dynamique du transcriptome au cours de la prolifération et de la différenciation cellulaires. Par ses rôles dans le traitement de l’ARN et le contrôle post‑transcriptionnel, une perturbation de la fonction de hnRNP A/B peut influencer des voies liées aux réponses au stress, au maintien du génome et à la protéostase. Une activité dérégulée de la famille hnRNP a été associée à une altération du métabolisme de l’ARN dans le cancer et les maladies neurodégénératives, ce qui fait de Hnrnpab une cible utile pour des études mécanistiques dans des modèles pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO hnRNP A/B (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hnrnpab dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hnrnpab, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hnrnpab à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine hnRNP A/B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hnrnpab pour l'étude de la signalisation de hnRNP A/B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Hnrnpab essentiels à la fonction de hnRNP A/B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hnrnpab pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le hnRNP A/B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le hnRNP A/B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hnrnpab. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le hnRNP A/B plasmide HDR (m) et le hnRNP A/B (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hnrnpab pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hnrnpab définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.