HNF-6 Double Nickase Plasmid (h): sc-401082-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HNF-6 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HNF-6 Double-Nickase-Plasmid (h) und HNF-6 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ONECUT1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HNF-6: sc-376167
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HNF-6 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401082-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HNF-6 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401082-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ONECUT1 kodiert den Hepatozyten-Nuklearfaktor 6 (HNF-6), einen CUT-Homeobox-Transkriptionsfaktor, der Entwicklungs- und Stoffwechsel-Genprogramme in endodermabgeleiteten Geweben wie Leber und Pankreas koordiniert. HNF-6 reguliert die epitheliale Differenzierung, die Gangmorphogenese und die Festlegung sekretorischer Zelllinien, indem es Transkriptionsnetzwerke moduliert, die sich mit der hepatobiliären Entwicklung, der endokrinen Differenzierung des Pankreas und übergeordneten Signalwegen der metabolischen Homöostase überschneiden. Eine veränderte ONECUT1/HNF-6-Aktivität wurde in experimentellen Systemen mit gestörter Leber- und Pankreasfunktion in Verbindung gebracht und weist auf eine Rolle dieses Regulators bei Mechanismen hin, die für Diabetesanfälligkeit, cholestatische Phänotypen und hepatobiliäre Dysgenesien relevant sind. Als sequenzspezifischer Transkriptionsregulator wird HNF-6 häufig hinsichtlich seiner Effekte auf Zellidentität, Chromatinzustand und kontextabhängige Genexpressionsprogramme untersucht.
HNF-6 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ONECUT1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ONECUT1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ONECUT1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ONECUT1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.