HNF-3γ Double Nickase Plasmid (h): sc-401720-NIC

FOXA3 kodiert den Hepatozyten‑Nuklearfaktor 3 Gamma (HNF‑3γ), einen Forkhead/winged‑helix‑Transkriptionsfaktor, der die Chromatinzugänglichkeit reguliert und während der Endodermentwicklung gewebespezifische Transkriptionsprogramme koordiniert. In differenzierten Zellen trägt HNF‑3γ über Interaktionen mit Signalwegen nukleärer Rezeptoren sowie hepatozytären Transkriptionsfaktoren zu Gen-Netzwerken in Leber und gastrointestinalem Epithel bei, die den Glukose- und Lipidstoffwechsel, den Umgang mit Xenobiotika und sekretorische Funktionen steuern. Eine veränderte FOXA3-Expression oder gestörte regulatorische Schaltkreise wurden mit einer dysregulierten metabolischen Homöostase und Veränderungen des Linien- bzw. Differenzierungszustands in hepatobiliären und gastrointestinalen Erkrankungen in Verbindung gebracht, was FOXA3 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der transkriptionellen Kontrolle der Zellidentität macht. FOXA3 wird außerdem als Marker und Modulator in Reprogrammierungs- und Differenzierungsmodellen eingesetzt, in denen die Pionierfaktor-Aktivität die Nutzung von Enhancern und Promotoren prägt.

HNF-3γ Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FOXA3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FOXA3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FOXA3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FOXA3-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.