HMG-I/HMG-Y Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402396

Descripción general

HMGA1 codifica las proteínas arquitectónicas de la cromatina HMG-I y HMG-Y, factores de unión al ADN tipo AT-hook que remodelan la cromatina para modular la transcripción, la replicación y la organización genómica de orden superior. Al unirse a regiones reguladoras ricas en AT, HMGA1 facilita el ensamblaje del enhanceosoma e influye en programas transcripcionales ligados a la señalización, incluido el control del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y vías inflamatorias como la expresión génica dependiente de NF-κB. La expresión o actividad desregulada de HMGA1 se asocia con cambios en la plasticidad celular, la proliferación y la adaptación metabólica, y se estudia con frecuencia en el contexto de redes transcripcionales oncogénicas y la progresión tumoral. HMGA1 también afecta la accesibilidad de la cromatina en loci específicos de linaje, lo que la convierte en un nodo útil para investigar la regulación epigenética y la expresión génica sensible al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HMG-I/HMG-Y (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HMGA1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HMGA1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HMGA1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HMG-I/HMG-Y.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HMGA1 para la investigación de la señalización de HMG-I/HMG-Y, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de HMGA1 críticos para la función de HMG-I/HMG-Y
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HMGA1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HMG-I/HMG-Y CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HMG-I/HMG-Y CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HMGA1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HMG-I/HMG-Y (h) y el plásmido HDR HMG-I/HMG-Y (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HMGA1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HMGA1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.