The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
HM74双切口酶质粒(m): sc-429832-NIC
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- HM74 双切口酶质粒（m）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- HM74双切酶质粒（m）和HM74双切酶质粒（m2）编码针对Hcar2的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：HM74: sc-377292，通过WB, IF或者IHC分析
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| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
HM74双切口酶质粒(m) | sc-429832-NIC | 20 µg | $410.00 |
小鼠 Hcar2 编码 G 蛋白偶联受体 HM74（亦称 GPR109A），它是烟酸及相关代谢物的高亲和力受体，主要与 Gi 信号通路偶联。HM74 的激活可降低细胞内 cAMP 水平，并启动影响炎症基调、趋化和脂质处理的下游通路，包括对 NF-κB 相关转录程序的调控。该受体在免疫细胞及与屏障功能相关的细胞类型中表达，常用于研究饮食、微生物群来源信号与先天免疫调控交界处的代谢物感知。HM74/Hcar2 信号的异常已在血脂异常、与动脉粥样硬化相关的炎症、类结肠炎样病理以及肿瘤相关免疫微环境等模型中被提示参与其中，因此与免疫代谢机制研究密切相关。
HM74 双切酶质粒（m）由一对匹配的质粒组成，专为在 mouse 细胞系中对 Hcar2 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Hcar2内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏Hcar2的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了Hcar2基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。