HLA-E Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-403124-LAC
- alvos específicos: human
- 200 µl de alto titulo de partículas de ativação lentiviral CRISPR/dCas9 prontas para a transdução of transduction-ready
- HLA-E as Partículas de Ativação Lentiviral (h) agem como um sistema de ativação de transcrição sinergética ao mediador de ativação (SAM, que foi criado para regular positivamente com especificidade e eficiência a expressão genética via transdução celular com lentivirus
- HLA-E As partículas de ativação lentivirais (h) contem os seguintes elementos de ativação SAM:uma nuclease Cas9 (dCas9) desativada (D10A and N863A) ligadas a um domínio de transactivacao VP64, uma proteína de fusão MS2-p65-HSF1 e um alvo-especifico de RNA guia de 20 nt guia RNA. Ainda, as partículas contem genes de resistência a blasticidina, higromicina e puromicina
- Durante a transdução, o complexo SAM se liga a uma região especifica de aproximadamente 200-250 nt upstream da região de inicia da transcrição e assegura um recrutamento robusto de fatores de transcrição para uma eficiente ativação genética
- Os gRNAs codificados pelo HLA-E Plasmídeo de Ativação Lentiviral (h) e pelo HLA-E Plasmídeo de Ativação Lentiviral (h2) têm como alvo regiões reguladoras distintas do promotor HLA-E. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo: HLA-E Anticorpo (MEM-E/02): sc-51621
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
HLA-E Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h) | sc-403124-LAC | 200 µl | $455.00 |
HLA-E codifica uma molécula não clássica do MHC de classe I que apresenta um repertório restrito de peptídeos, incluindo peptídeos da sequência líder de outras proteínas HLA de classe I, para regular a vigilância imunológica. Ao interagir com recetores inibitórios e ativadores como NKG2A/CD94 e NKG2C/CD94 em células natural killer e em subpopulações de células T, o HLA-E modula a citotoxicidade, a produção de citocinas e a tolerância na superfície celular. A sua expressão e o carregamento de peptídeos estão ligados às vias de processamento e apresentação de antigénios que envolvem o TAP e o complexo de carregamento de peptídeos no retículo endoplasmático. A desregulação da abundância de HLA-E ou da apresentação de peptídeos é estudada em contextos de infeção, inflamação, evasão imunitária tumoral e imunobiologia de transplantes, nos quais a sinalização de checkpoint de células NK molda os desfechos imunitários.
As Partículas de Ativação Lentivirais HLA-E (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de HLA-E numa gama mais ampla de tipos de células humanas.
As Partículas de Ativação Lentivirais HLA-E (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição HLA-E, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de HLA-E. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo HLA-E e a arquitetura reguladora.
O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.