HLA-DRα CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401010-ACT

HLA-DRA kodiert die HLA-DRα-Kette, eine wesentliche Komponente von MHC‑Klasse‑II-Heterodimeren, die exogene Peptidantigene CD4+-T‑Zellen präsentieren und die adaptive Immunaktivierung koordinieren. HLA-DRα ist an Signalwegen der Antigenverarbeitung und -präsentation beteiligt, darunter der invariant-chain-abhängige Transport durch endosomale Kompartimente sowie das durch HLA-DM regulierte Peptid-Loading, wodurch die T‑Zell-Selektion und periphere Immunantworten geprägt werden. Veränderungen der MHC‑Klasse‑II-Expression oder ihrer Regulation sind eng mit Immundysregulation und inflammatorischer Pathologie verknüpft und haben hohe Relevanz für Autoimmunität und die Transplantationsimmunbiologie. Eine veränderte HLA‑DR-Expression wird zudem breit als Marker für Aktivierungszustände myeloider Zellen und B‑Zellen verwendet und unterstützt Studien zur Immunzelldifferenzierung und zu Antworten auf Zytokin-Signalgebung.

HLA-DRα Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HLA-DRA-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HLA-DRα Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HLA-DRA-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HLA-DRA-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HLA-DRα-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HLA-DRA-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HLA-DRα-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HLA-DRα-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HLA-DRA-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.