Plásmido Doble Nickase (h) HLA-DP β1: sc-401413-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)HLA-DP β1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa HLA-DP β1 (h) y el plásmido de doble nickasa HLA-DP β1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a HLA-DPB1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HLA-DP β1 Anticuerpo (7-RE35): sc-134357
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) HLA-DP β1 | sc-401413-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) HLA-DP β1 | sc-401413-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HLA-DPB1 codifica la cadena β1 de HLA-DP, que se empareja con HLA-DPA1 para formar el receptor heterodimérico HLA-DP del MHC de clase II en células presentadoras de antígeno profesionales. Este complejo se une a antígenos peptídicos exógenos y los presenta a linfocitos T CD4+, modulando la activación inmunitaria adaptativa, la tolerancia y la polarización de citocinas a través de las vías de procesamiento y presentación de antígenos. La expresión de HLA-DP está regulada por programas transcripcionales sensibles al interferón-γ, incluida la inducción del MHC II impulsada por CIITA, lo que la vincula con la señalización inflamatoria y la diferenciación de células inmunitarias. La variación genética y la expresión desregulada de HLA-DPB1 se han asociado con cambios en el reconocimiento aloinmunitario y con la susceptibilidad a afecciones mediadas por el sistema inmunitario, lo que respalda estudios mecanísticos de la presentación de antígenos y de las respuestas de los linfocitos T.
HLA-DP β1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HLA-DPB1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HLA-DPB1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HLA-DPB1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HLA-DPB1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.