Plasmide CRISPR/Cas9 KO HLA-DOβ (h): sc-406402
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- HLA-DOβ Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique HLA-DOβ, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HLA-DOβ Antibody (DOB.L1): sc-69739
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO HLA-DOβ (h) | sc-406402 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
HLA-DOB code la sous-unité HLA-DOβ, qui s’associe à HLA-DOα pour former l’hétérodimère HLA-DO, exprimé principalement dans les cellules présentatrices d’antigène. Dans les endosomes tardifs et les lysosomes, HLA-DO module l’activité de HLA-DM afin d’ajuster finement le chargement des peptides sur les molécules du CMH de classe II, façonnant ainsi le répertoire de peptides présentés aux lymphocytes T CD4+. Cette régulation relie HLA-DOβ au traitement et à la présentation de l’antigène, à la tolérance immunitaire adaptative et aux réponses immunitaires aux infections. Une altération de l’édition des peptides du CMH de classe II et les variations de la région HLA sont pertinentes pour les études sur l’auto-immunité, les mécanismes des maladies inflammatoires et les interactions tumeur–système immunitaire, où la qualité de la présentation antigénique influence la reconnaissance immunitaire.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HLA-DOβ (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HLA-DOB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HLA-DOB, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HLA-DOB à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HLA-DOβ.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HLA-DOB pour l'étude de la signalisation de HLA-DOβ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de HLA-DOB essentiels à la fonction de HLA-DOβ
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HLA-DOB pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le HLA-DOβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HLA-DOβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HLA-DOB. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le HLA-DOβ plasmide HDR (h) et le HLA-DOβ (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HLA-DOB pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HLA-DOB définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.