Plasmide Double Nickase (h) Histone H1⁰: sc-403716-NIC

H1F0 code pour la variante d’histone de liaison H1 indépendante de la réplication, l’Histone H10, qui se fixe à l’ADN d’entrée/sortie du nucléosome afin de stabiliser l’organisation de la chromatine à un niveau supérieur et d’ajuster l’accessibilité du génome. Son accumulation est fréquemment associée à la différenciation cellulaire et à une diminution du potentiel prolifératif, reflétant des rôles dans la compaction de la chromatine, la régulation de la transcription et le maintien de l’état épigénétique. En modulant l’espacement des nucléosomes et les propriétés physiques de la chromatine, l’Histone H10 influence des processus tels que le timing de réplication de l’ADN, les réponses aux dommages de l’ADN et les programmes globaux d’expression génique. Des altérations de l’expression de H1F0 et de l’organisation de la chromatine ont été rapportées dans divers contextes de la biologie tumorale et de la spécification de lignée, ce qui étaye son utilisation comme marqueur et comme nœud mécanistique dans les études de dérégulation épigénétique.

Histone H10 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus H1F0 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de H1F0. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de H1F0. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de H1F0.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.