Plasmide CRISPR d'Activation (h) Histone H1: sc-404845-ACT

HIST1H1B code l’histone H1.5, un membre de la famille des histones de liaison H1, qui se fixe à l’ADN nucléosomique aux sites d’entrée et de sortie afin de favoriser la compaction de la chromatine en structures de plus haut ordre et de réguler l’accessibilité du génome. En modulant l’architecture de la chromatine, l’histone H1 influence le contrôle transcriptionnel, le calendrier de la réplication de l’ADN, ainsi que la coordination des réponses aux dommages de l’ADN et de leur réparation. Une expression altérée ou une régulation post‑traductionnelle des variants H1 est associée à une dérégulation épigénétique, à des programmes de différenciation aberrants et à des phénotypes prolifératifs observés dans de multiples contextes pathologiques, ce qui soutient son utilité en tant que nœud mécanistique pour la recherche sur la chromatine et la transcription.

Histone H1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HIST1H1B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Histone H1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HIST1H1B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HIST1H1B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Histone H1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HIST1H1B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Histone H1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Histone H1 dans les cellules tumorales présentant une expression de HIST1H1B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.