Plasmide Double Nickase (m) Histone Deacetylase 3 (HDAC3): sc-420818-NIC

Hdac3 code l’histone désacétylase 3 (HDAC3), une histone désacétylase de classe I qui constitue le cœur catalytique des complexes corépresseurs NCoR/SMRT et régule l’accessibilité de la chromatine via la désacétylation des lysines. Dans les cellules murines, HDAC3 coordonne des programmes de répression transcriptionnelle liés au contrôle du cycle cellulaire, aux réponses aux dommages de l’ADN et à l’homéostasie métabolique, en intégrant des signaux provenant des récepteurs nucléaires et des voies inflammatoires. En remodelant les états épigénétiques, HDAC3 influence l’engagement de lignée et l’expression génique spécifique des tissus ; sa perturbation est associée à une prolifération dérégulée ainsi qu’à des phénotypes immunitaires et métaboliques altérés. Ces fonctions font de Hdac3 une cible largement utilisée pour étudier les mécanismes dépendants de la chromatine qui sous-tendent des programmes transcriptionnels pertinents pour le cancer, l’inflammation et la biologie des maladies métaboliques.

Histone Deacetylase 3 (HDAC3) Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Hdac3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Hdac3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Hdac3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Hdac3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.