Plasmide Double Nickase (h) Histone cluster 1 H1D: sc-408739-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Histone cluster 1 H1D correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Histone cluster 1 H1D Double Nickase (h) et le plasmide Histone cluster 1 H1D Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HIST1H1D. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (h) Histone cluster 1 H1D | sc-408739-NIC | 20 µg | $410.00 |
HIST1H1D code l’histone du cluster 1 H1D, une histone de liaison qui se fixe à l’ADN nucléosomal aux sites d’entrée et de sortie afin de favoriser une compaction de la chromatine d’ordre supérieur et de réguler l’accessibilité du génome. En modulant l’espacement des nucléosomes et l’organisation de la fibre de chromatine, H1D influence les programmes transcriptionnels, le calendrier de réplication de l’ADN, ainsi que l’efficacité de la signalisation et de la réparation des dommages à l’ADN. Des altérations de l’abondance ou de la distribution de l’histone H1 sont associées à une dérégulation épigénétique, à l’instabilité génomique et à des états de différenciation aberrants observés dans divers modèles de cancer et de biologie du développement. En tant que membre du cluster d’histones, HIST1H1D est également pertinent pour l’étude de l’assemblage de la chromatine couplé à la réplication et du remodelage de la chromatine lié au cycle cellulaire.
Histone cluster 1 H1D Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HIST1H1D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HIST1H1D. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HIST1H1D. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HIST1H1D.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.