Histamine H4 Receptor CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402430

Übersicht

HRH4 kodiert den Histamin‑H4‑Rezeptor (H4R), einen Gi/o‑gekoppelten GPCR, der überwiegend in hämatopoetischen und immunologischen Zellkompartimenten exprimiert wird. Dort erkennt er Histamin und reguliert Chemotaxis, Zytokinfreisetzung sowie calciumabhängige Signalwege. Die Rezeptoraktivierung hemmt die Adenylylcyclase, moduliert die cAMP‑Spiegel und ist mit MAPK‑ und PI3K‑assoziierten Signalnetzwerken verknüpft, die die Leukozytenmigration und das Ausmaß der Entzündungsreaktion mitbestimmen. Die HRH4‑Aktivität trägt zum Trafficking von Immunzellen und zu barriereassoziierten Entzündungen bei und verbindet histaminerge Signalgebung mit allergischen und entzündlichen Prozessen. Eine fehlregulierte H4R‑Signalübertragung wurde u. a. im Zusammenhang mit Asthma, Dermatitis, Pruritus und allgemeineren immunvermittelten Pathologien untersucht, wobei häufig rezeptorabhängige Veränderungen von Chemokinantworten und der Rekrutierung von Leukozyten bewertet werden.

Das Histamine H4 Receptor CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des HRH4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des HRH4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von HRH4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Histamine H4 Receptor-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von HRH4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Histamine H4 Receptor-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf HRH4-Exone abzielen, die für die Histamine H4 Receptor-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere HRH4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Histamine H4 Receptor CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Histamine H4 Receptor CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des HRH4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Histamine H4 Receptor HDR-Plasmid (h) und Histamine H4 Receptor HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von HRH4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten HRH4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.