Plasmide Double Nickase (h) Histamine H1 Receptor: sc-401393-NIC

HRH1 code le récepteur humain de l’histamine H1 (H1R), un récepteur couplé aux protéines G de classe A principalement associé à Gq/11, qui convertit le signal histaminergique en activation de la phospholipase C, production d’inositol phosphates, mobilisation du Ca2+ intracellulaire et programmes dépendants de la protéine kinase C. La signalisation de H1R interfère avec les voies MAPK/ERK et NF-κB pour réguler le tonus et la perméabilité vasculaires, la contraction du muscle lisse et l’expression de gènes inflammatoires dans des contextes immunitaires et épithéliaux. Une activité et une expression altérées de HRH1 ont été associées à l’hyperréactivité des voies aériennes, à l’inflammation allergique, au prurit et à la modulation neuro-immune, ce qui en fait un nœud utile pour étudier la régulation histaminergique des fonctions de barrière et neuronales. HRH1 est également utilisé comme GPCR modèle pour étudier la désensibilisation des récepteurs, le trafic médié par la β-arrestine et la signalisation biaisée par les ligands.

Histamine H1 Receptor Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HRH1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HRH1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HRH1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HRH1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.