Plasmide Double Nickase (h) HIGD2A: sc-406650-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) HIGD2A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HIGD2A Double Nickase (h) et le plasmide HIGD2A Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HIGD2A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HIGD2A Antibody (A-6): sc-390505
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) HIGD2A | sc-406650-NIC | 20 µg | $410.00 |
HIGD2A (hypoxia inducible domain family member 2A) code une petite protéine de la membrane interne mitochondriale qui soutient la phosphorylation oxydative en favorisant l’assemblage et la stabilité de la cytochrome c oxydase (complexe IV), notamment via la régulation de la biogenèse du module COX3. En influençant l’intégrité de la chaîne de transport d’électrons, HIGD2A contribue à la respiration mitochondriale, au maintien du potentiel de membrane et aux réponses cellulaires au stress métabolique et à l’hypoxie. Une altération de la fonction de HIGD2A devrait perturber l’homéostasie bioénergétique, la gestion des espèces réactives de l’oxygène et les voies de contrôle qualité mitochondriales. Ces processus sont fréquemment étudiés dans le contexte de la dysfonction mitochondriale et du remodelage métabolique observés dans divers phénotypes cellulaires pertinents pour les maladies.
HIGD2A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HIGD2A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HIGD2A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HIGD2A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HIGD2A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.