HGF Double Nickase Plasmid (h): sc-400433-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HGF Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HGF Double-Nickase-Plasmid (h) und HGF Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HGF abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HGFα: sc-374422
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HGF Double Nickase Plasmid (h) | sc-400433-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HGF Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400433-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Der Hepatozyten-Wachstumsfaktor (HGF) kodiert ein sezerniertes pleiotropes Zytokin, das als hochaffiner Ligand für die MET-Rezeptor-Tyrosinkinase fungiert. Die HGF–MET-Signalübertragung aktiviert PI3K–AKT-, RAS–MAPK-, STAT- sowie fokale-Adhäsions-abhängige Signalwege, um Zellüberleben, Proliferation, Motilität, Morphogenese und epithelial–mesenchymale Interaktionen zu regulieren. Im Kontext von Gewebeschädigungen trägt HGF zu Regenerationsprogrammen und zum stromal–epithelialen Crosstalk bei, der das Remodelling der extrazellulären Matrix und angiogene Antworten mitprägt. Eine dysregulierte HGF-Expression oder eine aberrante Aktivität des MET-Signalwegs ist mit onkogener Invasion und Metastasierung, fibrotischem Umbau sowie entzündungsassoziierten Pathologien verknüpft, wodurch HGF ein häufiges Ziel mechanistischer Studien zur Signalgebung im Mikromilieu ist.
HGF Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HGF-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HGF abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HGF-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HGF-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.