Plasmide CRISPR d'Activation (h) HES4: sc-408938-ACT

Le gène humain **HES4** code un répresseur transcriptionnel à domaine **hélice-boucle-hélice (bHLH)** de la famille **Hairy/Enhancer-of-split**, qui agit comme effecteur en aval de la signalisation canonique **Notch**. En se liant à des motifs de type **E-box** et en recrutant des complexes corépresseurs, HES4 module des programmes transcriptionnels qui contrôlent les décisions de destinée cellulaire, le calendrier de différenciation et le maintien d’états de type progéniteur. L’activité de HES4 est associée à des processus de développement et de spécification des lignages, et s’articule avec des voies régissant la « stemness » et la différenciation, ce qui la rend pertinente pour l’étude d’un contrôle transcriptionnel dérégulé dans le cancer et d’autres troubles prolifératifs. Comme les perturbations de l’axe Notch–HES peuvent infléchir les trajectoires de différenciation et modifier la capacité proliférative, HES4 est fréquemment étudié comme régulateur dépendant du contexte des réseaux d’expression génique.

HES4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HES4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HES4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HES4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HES4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HES4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HES4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HES4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HES4 dans les cellules tumorales présentant une expression de HES4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.