HES1 Lentiviral Activation Particles (m): sc-420832-LAC

Maus-HES1 (Hes1) kodiert einen basischen Helix-Loop-Helix-Transkriptionsrepressor, der als kanonischer Effektor der Notch-Signalgebung wirkt. HES1 moduliert Zellschicksalsentscheidungen, indem es proneurale und pro-differenzierende Transkriptionsprogramme unterdrückt und dadurch Vorläuferzustände aufrechterhält sowie Proliferation, Differenzierungszeitpunkt und Gewebemusterbildung reguliert. Es ist an oszillierenden Genexpressionsnetzwerken beteiligt und steht im Austausch (Cross-Talk) mit Signalwegen wie Wnt und Hedgehog, um die Linienfestlegung in mehreren Geweben, einschließlich des Nervensystems und von Immun-Kompartimenten, zu steuern. Eine fehlregulierte HES1-Aktivität wurde mit veränderter Stamm-/Vorläuferdynamik und Entwicklungsdefekten in Verbindung gebracht und wird häufig in Modellen onkogener Transkriptionsprogramme sowie von Mechanismen des Therapieansprechens untersucht, ohne dass damit ein klinischer Nutzen impliziert wird.

HES1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Hes1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

HES1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Hes1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen HES1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Hes1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.