HERG Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401143-ACT

KCNH2 codifica o canal de potássio humano HERG dependente de voltagem (Kv11.1), um determinante central da corrente retificadora tardia rápida que molda a repolarização do potencial de ação cardíaco. O gating do canal e a expressão na superfície celular integram-se aos programas de excitabilidade de membrana e são modulados por vias de sinalização que influenciam a fosforilação, o tráfego intracelular e a proteostase em células excitáveis. Perturbações genéticas e funcionais de KCNH2 estão fortemente associadas às síndromes do QT longo hereditárias e adquiridas e à suscetibilidade a arritmias, tornando-o um nó-chave para o estudo de eletrofisiologia, regulação de canais iônicos e mecanismos de cardiotoxicidade. Para além do contexto cardíaco, a atividade do HERG é usada para investigar estados celulares dependentes de canais iônicos nos quais a condutância de potássio afeta a proliferação, as respostas ao stress e a sinalização bioelétrica.

HERG O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KCNH2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HERG O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KCNH2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KCNH2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HERG. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KCNH2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HERG no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HERG em células tumorais com expressão de KCNH2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.