HERG CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401143-ACT

KCNH2 kodiert den menschlichen spannungsabhängigen HERG-Kaliumkanal (Kv11.1), einen zentralen Determinanten des schnellen verzögerten Gleichrichterstroms, der die Repolarisation des kardialen Aktionspotenzials prägt. Kanal-Gating und Oberflächenexpression sind in Programme der Membranerregbarkeit eingebettet und werden durch Signalwege moduliert, die Phosphorylierung, Trafficking und Proteostase in erregbaren Zellen beeinflussen. Genetische und funktionelle Störungen von KCNH2 sind stark mit angeborenen und erworbenen Long-QT-Syndromen sowie einer erhöhten Arrhythmieanfälligkeit assoziiert, was das Gen zu einem zentralen Knotenpunkt für die Untersuchung der Elektrophysiologie, der Ionenkanalregulation und von Kardiotoxizitätsmechanismen macht. Über kardiale Kontexte hinaus wird die HERG-Aktivität genutzt, um ionenkanalabhängige Zellzustände zu untersuchen, in denen Kaliumleitfähigkeit Proliferation, Stressantworten und bioelektrische Signalgebung beeinflusst.

HERG Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen KCNH2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HERG Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des KCNH2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der KCNH2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HERG-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native KCNH2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HERG-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HERG-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem KCNH2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.