Plasmide CRISPR d'Activation (h) Hepatic Lipase: sc-403928-ACT

LIPC code la lipase hépatique, une enzyme lipolytique associée au foie et à l’endothélium, qui hydrolyse les triglycérides et les phospholipides des lipoprotéines circulantes, remodelant ainsi les HDL et les particules contenant l’apoB. Par ses actions à la surface des hépatocytes et au sein du compartiment vasculaire, la lipase hépatique contribue à la captation des lipoprotéines, au transport inverse du cholestérol et, plus largement, à l’homéostasie lipidique. Des variations de l’expression ou de l’activité de LIPC ont été associées à des profils lipidiques plasmatiques altérés, notamment à des modifications du cholestérol HDL et des lipoprotéines riches en triglycérides, reliant cette voie à des phénotypes cardiométaboliques. En tant que régulateur nodal du métabolisme des lipoprotéines, LIPC est fréquemment étudié en biologie des hépatocytes, dans le trafic lipidique et dans les réseaux transcriptionnels sensibles aux nutriments.

Hepatic Lipase Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LIPC sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Hepatic Lipase Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LIPC dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LIPC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Hepatic Lipase. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LIPC natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Hepatic Lipase au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Hepatic Lipase dans les cellules tumorales présentant une expression de LIPC silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.