Hemoglobin α1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420800

Übersicht

Hba-a1 kodiert die Hämoglobin‑α1‑Untereinheit der Maus, einen zentralen Bestandteil des adulten Hämoglobin-Tetramers, das Häm bindet und den reversiblen Sauerstofftransport in Erythrozyten ermöglicht. Seine Expression ist während der Erythropoese eng mit der Expression der β‑Globin‑Gene und der Enzyme der Hämbiosynthese koordiniert und verknüpft Hba-a1 damit mit der Regulation der Globin-Gene, dem Eisenstoffwechsel und der Reifung roter Blutkörperchen. Eine Störung der α‑Globin‑Gen-Dosis beeinträchtigt den Hämoglobinaufbau und das Redoxgleichgewicht, fördert eine ineffektive Erythropoese und hämolytische Stressphänotypen und bildet damit Merkmale der α‑Thalassämie und verwandter Anämie-Biologie nach. Als stark exprimiertes, linienrestriktiertes Gen wird Hba-a1 häufig genutzt, um die regulatorische Architektur am α‑Globin‑Lokus sowie Mechanismen zu untersuchen, die die erythroide Differenzierung steuern.

Das Hemoglobin α1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Hba-a1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Hba-a1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Hba-a1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Hemoglobin α1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Hba-a1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Hemoglobin α1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Hba-a1-Exone abzielen, die für die Hemoglobin α1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Hba-a1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Hemoglobin α1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Hemoglobin α1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Hba-a1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Hemoglobin α1 HDR-Plasmid (m) und Hemoglobin α1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Hba-a1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Hba-a1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.