hemicentin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405850

Übersicht

HMCN1 kodiert Hemicentin-1, ein großes extrazelluläres Matrixglykoprotein, das zur Organisation der Architektur der Basalmembran beiträgt und die Zell–Matrix-Adhäsion in Geweben unterstützt, die mechanischer Belastung ausgesetzt sind. Hemicentin-1 ist an Aufbau und Umbau der extrazellulären Matrix beteiligt und beeinflusst dadurch Prozesse wie die Integrität von Epithelien, die Gewebemorphogenese und die wundassoziierte Matrixdynamik. Störungen oder Fehlregulationen von HMCN1 wurden mit Bindegewebs- und okulären Phänotypen in Verbindung gebracht, und genetische Studien haben Varianten mit einem erhöhten Risiko für altersbedingte Makuladegeneration assoziiert, was die Relevanz für die Biologie der retinalen extrazellulären Matrix unterstreicht. Als ECM-Komponente bietet Hemicentin-1 einen hilfreichen Ansatzpunkt, um zu untersuchen, wie die Matrixorganisation Zellmigration, Mechanotransduktion und Barrierefunktion moduliert.

Das hemicentin-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des HMCN1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des HMCN1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von HMCN1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die hemicentin-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von HMCN1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der hemicentin-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf HMCN1-Exone abzielen, die für die hemicentin-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere HMCN1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom hemicentin-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom hemicentin-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des HMCN1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das hemicentin-1 HDR-Plasmid (h) und hemicentin-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von HMCN1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten HMCN1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.