HEATR5B Lentiviral Activation Particles (h2): sc-412293-LAC-2

Das humane Gen HEATR5B kodiert ein Protein mit HEAT-Repeats, dem eine Funktion als Gerüstprotein für Protein-Protein-Interaktionen zugeschrieben wird, das die koordinierte Assemblierung makromolekularer Komplexe und die intrazelluläre Organisation unterstützt. Auf Grundlage der konservierten Biologie von HEAT-Repeats wird erwartet, dass HEATR5B Prozesse wie den nukleozytoplasmatischen Transport, die Zytoskelettdynamik sowie die Regulation von Signalwegen und zellzyklusgekoppelten Pfaden beeinflusst, indem es die Lokalisation und Stabilität von Partnerproteinen moduliert. Eine veränderte Expression oder Variation in HEAT-Repeat-Gerüstfaktoren ist häufig mit gestörter Proteostase und zellulären Stressantworten assoziiert, Mechanismen, die für die Biologie proliferativer und neuroentwicklungsbezogener Erkrankungen relevant sind. Modelle zur Perturbation von HEATR5B sind daher nützlich, um die Konnektivität von Signalwegen zu untersuchen, Interaktionsnetzwerke zu kartieren und nachgelagerte transkriptomische und phänotypische Konsequenzen in humanen Zellsystemen zu bewerten.

HEATR5B Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente HEATR5B-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

HEATR5B Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der HEATR5B-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen HEATR5B-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen HEATR5B-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.