Plásmido CRISPR de Activación (h2) HEATR5B: sc-412293-ACT-2

El gen humano HEATR5B codifica una proteína que contiene repeticiones HEAT y se predice que actúa como un factor de andamiaje que organiza ensamblajes multiproteicos y favorece el tráfico intracelular y los procesos vinculados al citoesqueleto. Con base en las funciones conocidas de las proteínas con repeticiones HEAT, se espera que HEATR5B influya en el transporte nucleo‑citoplasmático, la dinámica de los complejos proteicos y la regulación de la expresión génica en respuesta al estrés, con efectos posteriores sobre las vías de crecimiento y diferenciación celular. La actividad o expresión alteradas de HEATR5B podrían contribuir a mecanismos patogénicos que implican una homeostasis del transporte perturbada y una señalización aberrante, lo que la hace relevante para estudios de disfunción celular compleja en enfermedades humanas. La edición génica de HEATR5B resulta útil para generar modelos celulares knockout o etiquetados con el fin de cartografiar interactomas, definir la localización subcelular e investigar fenotipos a nivel de vías mediante lecturas transcriptómicas y proteómicas.

HEATR5B El plásmido de activación CRISPR (h2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HEATR5B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HEATR5B El plásmido de activación CRISPR (h2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HEATR5B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HEATR5B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HEATR5B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HEATR5B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HEATR5B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HEATR5B en células tumorales con expresión de HEATR5B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.