Plásmido Doble Nickase (m) HE4: sc-426693-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)HE4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa HE4 (m) y el plásmido de doble nickasa HE4 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Wfdc2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) HE4 | sc-426693-NIC | 20 µg | $410.00 |
El gen Wfdc2 de ratón codifica HE4, una glicoproteína secretada que contiene un dominio de proteína de suero ácido (WAP) e implicada en la diferenciación epitelial y en la regulación de proteasas extracelulares. HE4 se asocia con la modulación de la proteólisis pericelular y de eventos de remodelación que influyen en la adhesión célula–célula y en la dinámica del microambiente tisular, procesos relevantes para los epitelios del tracto reproductor y de las vías respiratorias. La expresión alterada de WFDC2/HE4 se ha vinculado a contextos inflamatorios y neoplásicos, lo que la convierte en un marcador molecular útil de cambios en el estado epitelial y de la señalización asociada al estrés. En modelos murinos, Wfdc2 ofrece un punto de entrada manejable para estudiar factores secretados que acoplan la homeostasis epitelial con redes de proteasas y el recambio de la matriz extracelular.
HE4 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Wfdc2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Wfdc2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Wfdc2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Wfdc2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.