Plásmido Doble Nickase (h) HE4: sc-402876-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)HE4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa HE4 (h) y el plásmido de doble nickasa HE4 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a WFDC2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HE4 Anticuerpo (3F9): sc-293473
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) HE4 | sc-402876-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) HE4 | sc-402876-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
WFDC2 codifica la proteína humana HE4, una glucoproteína secretada que contiene un dominio de proteína ácida del suero (WAP) e implicada en la homeostasis y la remodelación epitelial. HE4 se ha asociado con la regulación de la actividad de proteasas extracelulares y de las interacciones con la matriz, respaldando procesos como la adhesión celular, la migración y la organización tisular. La expresión alterada de WFDC2/HE4 se estudia con frecuencia en el contexto de programas de señalización asociados a tumores, incluidas vías que influyen en la plasticidad epitelio-mesenquimal y en las respuestas del microambiente inflamatorio. Como factor secretado cuantificable, HE4 también se utiliza como lectura molecular para investigar la regulación transcripcional, la dinámica de secreción y las perturbaciones de vías extracelulares en modelos celulares humanos.
HE4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus WFDC2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de WFDC2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de WFDC2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con WFDC2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.