Plasmide CRISPR d'Activation (h) hDcp2: sc-418511-ACT

Le gène humain **DCP2** code **hDcp2**, une enzyme de décapage des ARNm qui retire la coiffe en 5′ afin d’initier la dégradation des ARNm de 5′ vers 3′, modulant ainsi le renouvellement des transcrits et la dynamique du protéome. hDcp2 agit au sein des corps cytoplasmiques de traitement des ARNm (processing bodies) et interagit avec des cofacteurs du décapage ainsi qu’avec des exonucléases pour réguler la surveillance des ARN, l’expression génique en réponse au stress et des voies de contrôle qualité telles que la dégradation médiée par les codons non-sens (NMD). En modulant la stabilité de sous-ensembles spécifiques d’ARNm, **DCP2** influence le contrôle du cycle cellulaire, les programmes de différenciation et les sorties de signalisation inflammatoire. Une dégradation et une dynamique des processing bodies dérégulées, liées à une activité de décapage altérée, sont pertinentes pour des mécanismes étudiés en cancérologie, en neurobiologie et dans les interactions virus–ARN de l’hôte.

hDcp2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DCP2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

hDcp2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DCP2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DCP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de hDcp2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DCP2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de hDcp2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie hDcp2 dans les cellules tumorales présentant une expression de DCP2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.