Plasmide CRISPR/Cas9 KO HCN2 (h): sc-405074

Présentation

HCN2 code le canal cationique 2 activé par hyperpolarisation et modulé par les nucléotides cycliques (Hyperpolarization-Activated Cyclic Nucleotide-Gated Channel 2), une sous-unité formant le pore des courants pacemaker Ih/If qui couple l’hyperpolarisation membranaire à un flux entrant de cations. En intégrant la dépendance au voltage et la signalisation via les nucléotides cycliques, HCN2 module l’excitabilité rythmique, régule le potentiel de membrane au repos et influence les profils de déclenchement des potentiels d’action dans les neurones et le tissu de conduction cardiaque. L’activité de HCN2 s’articule avec les voies GPCR–AMPc et avec des réseaux plus larges de canaux ioniques qui contrôlent l’intégration synaptique et la régulation autonome. Une fonction ou une expression dérégulée de HCN2 a été associée dans la littérature à des modifications de l’excitabilité neuronale et à des phénotypes de conduction pertinents pour des troubles tels que l’épilepsie, les douleurs neuropathiques et une susceptibilité accrue aux arythmies cardiaques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HCN2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HCN2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HCN2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HCN2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HCN2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HCN2 pour l'étude de la signalisation de HCN2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HCN2 essentiels à la fonction de HCN2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HCN2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HCN2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HCN2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HCN2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HCN2 plasmide HDR (h) et le HCN2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HCN2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HCN2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.