Plasmide CRISPR d'Activation (h) HCF1: sc-403097-ACT

HCFC1 code pour le facteur cellulaire hôte 1 (HCF1), un corégulateur transcriptionnel associé à la chromatine qui coordonne la progression du cycle cellulaire et l’expression de gènes spécifiques de lignée. HCF1 relie des facteurs de transcription spécifiques de séquence aux machineries épigénétiques et transcriptionnelles, notamment des complexes de modification des histones, afin de moduler l’activité des promoteurs et l’état de la chromatine. Par ces interactions, HCF1 influence des processus tels que la transition G1/S, des programmes transcriptionnels associés à la réplication et la régulation de gènes du métabolisme. Une dérégulation ou des variants pathogènes de HCFC1 ont été associés à des phénotypes neurodéveloppementaux et à une altération du contrôle transcriptionnel, ce qui souligne son intérêt pour l’étude des mécanismes de régulation génique dans des modèles de maladies humaines.

HCF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HCFC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HCF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HCFC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HCFC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HCF1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HCFC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HCF1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HCF1 dans les cellules tumorales présentant une expression de HCFC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.