Plasmide Double Nickase (h) HB9: sc-402097-NIC

MNX1 code le facteur de transcription à homéoboîte HB9, un régulateur de liaison à l’ADN spécifique de séquence, indispensable à la mise en place du patron ventral de la moelle épinière et à la différenciation des motoneurones au cours du développement. HB9 s’intègre aux programmes transcriptionnels en aval des signaux morphogéniques et coopère avec d’autres facteurs à homéodomaine pour établir l’identité des sous-types neuronaux, les propriétés de guidage axonal et la maturation des circuits moteurs. Dans les contextes hématopoïétiques, une expression dérégulée de MNX1 ainsi que des réarrangements chromosomiques impliquant ce locus ont été associés à des leucémies aiguës, soulignant sa pertinence dans la spécification de lignée aberrante et le contrôle transcriptionnel. En tant que régulateur du développement, MNX1 est fréquemment étudié dans des modèles de neurogenèse, de détermination du destin cellulaire et de dérégulation transcriptionnelle associée aux maladies.

HB9 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MNX1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MNX1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MNX1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MNX1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.