Plasmide CRISPR/Cas9 KO HARE (h): sc-405069

Présentation

STAB2 code le récepteur de l’hyaluronane impliqué dans l’endocytose (HARE), un récepteur scavenger multifonctionnel exprimé majoritairement par les cellules endothéliales sinusoïdales du foie et par certaines populations de la lignée macrophagique. HARE assure la capture dépendante de la clathrine et l’élimination lysosomale de l’hyaluronane ainsi que de divers ligands anioniques, reliant le renouvellement de la matrice extracellulaire à l’endocytose médiée par récepteur et à l’homéostasie vasculaire. En régulant le catabolisme de l’hyaluronane et le trafic des glycosaminoglycanes circulants, STAB2 influence la signalisation inflammatoire, la dynamique d’adhérence des leucocytes et les programmes de remodelage tissulaire. Des altérations de l’activité de STAB2 ont été associées à une prise en charge dysrégulée de l’hyaluronane dans des contextes de fibrose et de maladies inflammatoires, ce qui soutient son utilisation comme nœud mécanistique dans les études de biologie de la matrice et des voies de clairance.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HARE (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène STAB2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du STAB2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert STAB2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HARE.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en STAB2 pour l'étude de la signalisation de HARE, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de STAB2 essentiels à la fonction de HARE
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de STAB2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HARE plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HARE plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus STAB2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HARE plasmide HDR (h) et le HARE (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie STAB2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles STAB2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.