HAO2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405855

Descripción general

HAO2 (hidroxiácido oxidasa 2) codifica una oxidasa peroxisomal dependiente de FMN implicada en la oxidación de ácidos grasos 2‑hidroxilados, contribuyendo al catabolismo lipídico y a la homeostasis redox mediada por peroxisomas. Mediante la generación de peróxido de hidrógeno durante la oxidación del sustrato, HAO2 se relaciona con el control del estrés oxidativo celular y con vías de adaptación metabólica vinculadas a la función peroxisomal. La expresión alterada de HAO2 se ha asociado con la reprogramación metabólica en la biología hepática y se ha descrito en múltiples estudios transcriptómicos de carcinoma hepatocelular, lo que respalda su uso como marcador para investigar estados metabólicos asociados a tumores. Por tanto, la alteración o modulación de HAO2 es útil para estudiar el metabolismo lipídico peroxisomal, el manejo de especies reactivas de oxígeno y las consecuencias de señalización aguas abajo en modelos celulares humanos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HAO2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HAO2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HAO2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HAO2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HAO2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HAO2 para la investigación de la señalización de HAO2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de HAO2 críticos para la función de HAO2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HAO2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HAO2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HAO2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HAO2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HAO2 (h) y el plásmido HDR HAO2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HAO2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HAO2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.