HADHA Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402803-NIC

HADHA codifica a subunidade alfa da proteína trifuncional mitocondrial, um componente central da β-oxidação de ácidos graxos que catalisa as etapas de enoil-CoA hidratase e 3-hidroxiacil-CoA desidrogenase necessárias ao metabolismo de acil-CoA de ácidos graxos de cadeia longa. Em acoplamento com HADHB, HADHA sustenta a homeostase energética durante o jejum e em condições de alta demanda oxidativa, conectando o catabolismo lipídico à função mitocondrial e ao equilíbrio redox. A disfunção de HADHA está associada a distúrbios mitocondriais da oxidação de ácidos graxos, incluindo a deficiência de desidrogenase de 3-hidroxiacil-CoA de cadeia longa e a deficiência da proteína trifuncional mitocondrial, que podem se manifestar com cardiomiopatia, hipoglicemia hipocetótica e miopatia. Assim, HADHA é amplamente estudado em respostas ao estresse metabólico, proteostase mitocondrial e sinalização induzida por lipídios relevante para a biologia neuromuscular e cardíaca.

HADHA O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus HADHA em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de HADHA. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função HADHA. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com HADHA interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.