Plásmido CRISPR de Activación (h) GTPBP10: sc-413794-ACT

El gen humano **GTPBP10** codifica una proteína mitocondrial de unión a GTP implicada en etapas tardías de la maduración del mitorribosoma, lo que favorece el ensamblaje de la subunidad ribosomal grande y una traducción mitocondrial eficiente. Al regular la producción de componentes de la fosforilación oxidativa codificados por el ADN mitocondrial, GTPBP10 contribuye a la integridad de la cadena respiratoria, la generación de ATP y la proteostasis mitocondrial. La alteración de la biogénesis del mitorribosoma y de la traducción mitocondrial se asocia de forma amplia con respuestas al estrés bioenergético, cambios en el equilibrio redox y vías de disfunción mitocondrial que se investigan con frecuencia en modelos de enfermedades neuromusculares y metabólicas, así como en la adaptación de células cancerosas. Como resultado, GTPBP10 constituye un nodo útil para estudiar el ensamblaje del ribosoma mitocondrial, la regulación de OXPHOS y la señalización de estrés aguas abajo.

GTPBP10 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GTPBP10 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GTPBP10 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GTPBP10 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GTPBP10, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GTPBP10. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GTPBP10 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GTPBP10 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GTPBP10 en células tumorales con expresión de GTPBP10 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.