GTBP Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-404192-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- GTBPO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase GTBP (h) e o Plasmídeo Double Nickase GTBP (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para MSH6. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:GTBP Anticorpo (E-8): sc-137015
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
GTBP Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-404192-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GTBP Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-404192-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MSH6 codifica o fator de reparo de incompatibilidades do DNA GTBP, que forma o complexo MutSα com MSH2 para reconhecer incompatibilidades base–base e pequenos laços de inserção–deleção gerados durante a replicação e a recombinação do DNA. Após a detecção da lesão, o MutSα coordena eventos de reparo a jusante por meio do recrutamento de MLH1–PMS2 e de fatores de processamento associados, ajudando a manter a estabilidade do genoma e a limitar o acúmulo de mutações. A disrupção do reparo de incompatibilidades dependente de MSH6 contribui para a instabilidade de microssatélites e eleva a mutagênese espontânea, associando a disfunção de GTBP à predisposição a câncer hereditário e esporádico. Como componente central das vias de reparo do DNA e de fidelidade da replicação, MSH6 é amplamente estudado em mecanismos de mutagênese, tolerância a danos no DNA e respostas de checkpoint.
GTBP O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus MSH6 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de MSH6. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função MSH6. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com MSH6 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.