Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Gα o Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400897
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Gα o O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Gα o, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Gα o Anticorpo (A2): sc-13532
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Gα o Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400897 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
GNAO1 codifica a subunidade alfa Gαo da proteína G heterotrimérica humana, um componente dominante de sinalização da família Gi/o, enriquecido em neurônios, que acopla GPCRs ativados à inibição da adenilil ciclase e à modulação de canais iônicos. Por meio da regulação da sinalização cAMP/PKA, da atividade de canais de Ca2+ e K+ e de vias downstream de MAPK e de liberação de neurotransmissores, a Gαo molda a transmissão sináptica, a excitabilidade neuronal e o desenvolvimento de redes neurais. A alteração da função de GNAO1 está associada a fenótipos de transtornos do neurodesenvolvimento e do movimento, tornando-o um nó-chave para investigar a arquitetura de sinalização conduzida por GPCR em modelos celulares e neuronais. A perturbação experimental de GNAO1 sustenta estudos mecanísticos de especificidade de acoplamento de receptores, dinâmica de segundos mensageiros e respostas transcricionais dependentes de atividade.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Gα o (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene GNAO1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do GNAO1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do GNAO1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Gα o.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de GNAO1 para a investigação da sinalização de Gα o, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) GNAO1 críticos para a função Gα o
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos GNAO1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Gα o Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Gα o Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus GNAO1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Gα o Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Gα o (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia GNAO1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo GNAO1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.