Plasmide Double Nickase (h) Gα i-3: sc-400453-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Gα i-3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Gα i-3 Double Nickase (h) et le plasmide Gα i-3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GNAI3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Gα i-3 | sc-400453-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Gα i-3 | sc-400453-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GNAI3 code la sous-unité alpha Gαi-3 de la protéine G hétérotrimérique humaine, un interrupteur moléculaire régulé par le GDP/GTP qui couple de nombreux GPCR à l’inhibition de l’adénylate cyclase et à une diminution de la signalisation par l’AMPc. Via des effets en aval sur l’activité de la PKA, les canaux ioniques, ainsi que les réseaux associés aux voies MAPK/ERK et PI3K, Gαi-3 contribue à coordonner la chimiotaxie, la sécrétion et les décisions de croissance cellulaire en réponse à des signaux extracellulaires. Elle participe également aux programmes de trafic membranaire et de polarité en régulant le transport vésiculaire et la dynamique du cytosquelette. Des altérations de la signalisation GPCR–Gαi ont été associées à des comportements prolifératifs et migratoires dérégulés dans des contextes cellulaires pertinents pour la maladie, ce qui soutient des études mécanistiques du remodelage des voies de signalisation.
Gα i-3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GNAI3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GNAI3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GNAI3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GNAI3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.