Plásmido CRISPR de Activación (h) G_{α i-3}: sc-400453-ACT

GNAI3 codifica la subunidad humana Gαi-3 de las proteínas G heterotriméricas, que acopla muchos GPCR a la inhibición de la adenilil ciclasa, reduciendo el AMPc intracelular y modulando la señalización posterior dependiente de PKA. A través del ciclo GPCR–proteína G, Gαi-3 influye en la actividad de canales iónicos, la dinámica de la vía MAPK y la comunicación cruzada con la señalización PI3K/AKT, configurando respuestas como la quimiotaxis, la secreción y la proliferación. La alteración de la expresión de GNAI3 o la reorganización del eje GPCR–Gi se ha estudiado en contextos como la señalización inmunitaria, la función neuronal y redes de señalización asociadas al cáncer, donde la homeostasis del AMPc y los programas de migración se ven perturbados.

Gα i-3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GNAI3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Gα i-3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GNAI3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GNAI3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Gα i-3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GNAI3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Gα i-3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Gα i-3 en células tumorales con expresión de GNAI3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.