Plasmide Double Nickase (h) Gα i-2: sc-400568-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Gα i-2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Gα i-2 Double Nickase (h) et le plasmide Gα i-2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GNAI2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Gα i-2 Antibody (L5): sc-13534
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Gα i-2 | sc-400568-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Gα i-2 | sc-400568-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GNAI2 code la sous-unité α Gα i-2 de la protéine G hétérotrimérique humaine, un transducteur de signal régulé par le GDP/GTP qui relie les GPCR activés à l’inhibition de l’adénylate cyclase et à la diminution de la production d’AMPc. En se couplant à des voies dépendantes des GPCR, Gα i-2 module la signalisation via la PKA, la régulation des canaux ioniques, les sorties MAPK et les processus dépendants de la PI3K, influençant la chimiotaxie, la sécrétion et les réponses prolifératives dans divers types cellulaires. L’activité de GNAI2 est également intégrée à la désensibilisation et au trafic des récepteurs via la signalisation Gβγ et les réseaux GRK/β-arrestine, contribuant à déterminer l’amplitude et la durée des signaux. Une signalisation Gα i-2 dérégulée a été associée à des modifications de la migration des cellules immunitaires et à des contextes de signalisation de croissance aberrants, ce qui justifie son étude dans des mécanismes liés à l’inflammation et à l’oncogenèse, sans pour autant impliquer une utilité clinique.
Gα i-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GNAI2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GNAI2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GNAI2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GNAI2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.