Gα 15 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2): sc-403266-KO-2

Übersicht

GNA15 kodiert die menschliche Alpha‑Untereinheit des heterotrimeren G‑Proteins Gα15, einen „promiskuitiven“ Mediator der Gq‑Familie, der unterschiedlichste G‑Protein‑gekoppelte Rezeptoren (GPCRs) mit der Aktivierung der Phospholipase Cβ verbindet. Nach Rezeptoraktivierung fördert Gα15 die Signalgebung über Inositoltrisphosphat und Diacylglycerol, die Mobilisierung von intrazellulärem Ca²⁺, die Aktivität der Proteinkinase C sowie nachgeschaltete Transkriptionsprogramme, die Sekretion, Chemotaxis und Entzündungsreaktionen prägen. Diese Signalachse überschneidet sich mit MAPK‑ und anderen Second‑Messenger‑Signalwegen und beeinflusst dadurch Aktivierungszustände von Zellen in immunologischen und hämatopoetischen Kontexten. Veränderte GPCR–Gα15‑Kopplung und eine dysregulierte calciumabhängige Signalübertragung wurden mit krebs‑ und entzündungsassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, was den Einsatz in mechanistischen Studien zur Rezeptor‑„Umverdrahtung“ und Signalintegration unterstützt.

Das Gα 15 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GNA15-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GNA15-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GNA15 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Gα 15-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GNA15-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Gα 15-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GNA15-Exone abzielen, die für die Gα 15-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GNA15-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Gα 15 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Gα 15 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GNA15-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Gα 15 HDR-Plasmid (h) und Gα 15 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GNA15-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GNA15-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.