Plasmide CRISPR d'Activation (h) GSTT1: sc-408735-ACT

Le gène humain **GSTT1** code la **glutathion S-transférase thêta 1**, une enzyme de détoxification de phase II qui catalyse la conjugaison du glutathion réduit à des composés électrophiles, contribuant au maintien de l’homéostasie rédox cellulaire et à la défense contre les xénobiotiques et le stress oxydatif. L’activité de GSTT1 participe au métabolisme dépendant du glutathion de substances chimiques environnementales ainsi que de produits endogènes de la peroxydation lipidique, en interconnexion avec des voies qui modulent la gestion des espèces réactives de l’oxygène et la signalisation de réponse au stress. Des variations génétiques ou la délétion de GSTT1 ont été associées à une susceptibilité modifiée aux dommages induits par des toxiques et à des différences interindividuelles du métabolisme chimique, ce qui en fait une variable fréquemment étudiée comme modificateur du risque de carcinogenèse, des processus inflammatoires et des réponses pharmacogénomiques. En tant qu’enzyme cytosolique à large spectre de substrats, GSTT1 est également utilisée comme modèle pour explorer la capacité de détoxification et la régulation compensatoire au sein des membres de la famille des GST.

GSTT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GSTT1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GSTT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GSTT1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GSTT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GSTT1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GSTT1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GSTT1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GSTT1 dans les cellules tumorales présentant une expression de GSTT1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.