GSTO1 Double Nickase Plasmid (h): sc-404107-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GSTO1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GSTO1 Double-Nickase-Plasmid (h) und GSTO1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GSTO1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GSTO1: sc-130317
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GSTO1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404107-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GSTO1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404107-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Glutathion-S-Transferase Omega 1 (GSTO1) ist ein zytosolisches Enzym der Omega-Klasse der GSTs, das Glutathion nutzt, um Thioltransferase- und Deglutathionylierungsreaktionen zu katalysieren, und damit das zelluläre Redoxgleichgewicht sowie den Status der Protein-S-Glutathionylierung beeinflusst. Über diese Aktivitäten trägt GSTO1 zur Entgiftung und zur Regulation von Antworten auf oxidativen Stress bei und greift in den Glutathionstoffwechsel sowie in umfassendere, redoxkontrollierte Signalwege ein. Veränderungen der GSTO1-Expression oder -Aktivität wurden mit einer veränderten Anfälligkeit für oxidative Schäden und inflammatorische Signalgebung in Verbindung gebracht – Prozesse, die für Neurodegeneration, Krebsbiologie und metabolische Stresskontexte relevant sind. In humanen Zellen wird die Funktion von GSTO1 häufig im Zusammenhang mit der Verarbeitung reaktiver Elektrophile, der redoxabhängigen Regulation von Enzymen und stressadaptiven transkriptionellen Programmen untersucht.
GSTO1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GSTO1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GSTO1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GSTO1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GSTO1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.