Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) GSS: sc-402992-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GSS correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GSS Double Nickase (h) et le plasmide GSS Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GSS. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GSS Antibody (H-7): sc-166882
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GSS | sc-402992-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GSS | sc-402992-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La glutathion synthétase (GSS) code une enzyme dépendante de l’ATP qui catalyse l’étape finale de la biosynthèse du glutathion, en liant la glycine au γ-glutamylcystéine pour produire le glutathion réduit (GSH). En contrôlant les réserves intracellulaires de GSH, GSS contribue à l’homéostasie redox cellulaire, à la détoxification des composés électrophiles et au maintien de la signalisation dépendante des thiols en situation de stress oxydant. L’activité de GSS s’inscrit à l’interface du métabolisme du glutathion et de réseaux plus larges de défense antioxydante qui influencent la fonction mitochondriale, la S‑glutathionylation des protéines et les réponses aux xénobiotiques. Une altération de la fonction de GSS a été associée à des erreurs innées de la biosynthèse du glutathion et à des phénotypes liés à une augmentation des dommages oxydatifs, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la sensibilité au stress et de la vulnérabilité métabolique.
GSS Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GSS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GSS. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GSS. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GSS.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.