Plasmide CRISPR d'Activation (h) GSS: sc-402992-ACT

Le gène humain **GSS** code la glutathion synthétase, une enzyme ATP-dépendante qui catalyse la dernière étape de la biosynthèse du glutathion (GSH) en liant la glycine au γ‑glutamylcystéine. En contrôlant les réserves intracellulaires de GSH, GSS est au cœur de l’homéostasie redox, de la détoxification des électrophiles via les voies des glutathion S‑transférases, et de la protection contre les dommages oxydatifs qui influencent la fonction mitochondriale et les voies de signalisation de survie cellulaire. L’activité de GSS façonne les réponses cellulaires aux espèces réactives de l’oxygène et soutient l’adaptation métabolique en situation de stress, ce qui la relie à des processus tels que la susceptibilité à la ferroptose, le métabolisme des xénobiotiques et la signalisation inflammatoire. Une altération génétique ou fonctionnelle de GSS est associée à une carence en glutathion et à des phénotypes de stress oxydatif, établissant un lien mécanistique avec des dysfonctions hématologiques et neurologiques ainsi qu’avec une biologie plus large des maladies liées au déséquilibre redox.

GSS Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GSS sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GSS Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GSS dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GSS, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GSS. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GSS natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GSS au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GSS dans les cellules tumorales présentant une expression de GSS silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.