Plásmido Doble Nickase (h) GSDMDC1: sc-406596-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)GSDMDC1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GSDMDC1 (h) y el plásmido de doble nickasa GSDMDC1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GSDMD. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GSDMDC1 Anticuerpo (H-11): sc-393581
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) GSDMDC1 | sc-406596-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) GSDMDC1 | sc-406596-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GSDMD codifica gasdermina D, un efector formador de poros que se activa proteolíticamente aguas abajo de la señalización del inflamasoma y del corte por caspasas-1/4/5/11 para ejecutar la muerte celular piroptótica. Tras su activación, el fragmento N-terminal se oligomeriza en la membrana plasmática para formar poros que impulsan el flujo iónico, la hinchazón celular y la liberación de mediadores proinflamatorios como las citocinas de la familia de la IL-1, conectando la detección inmunitaria innata con resultados inflamatorios. Esta vía se intersecta con la señalización de receptores de reconocimiento de patrones, el cebado por NF-κB y la activación no canónica del inflamasoma, modulando la defensa antimicrobiana y la inflamación estéril. La actividad desregulada de la gasdermina D está implicada en la biología de enfermedades inflamatorias e infecciosas y se estudia ampliamente en células mieloides, barreras epiteliales y microambientes tumorales-inmunitarios.
GSDMDC1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GSDMD en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GSDMD. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GSDMD. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GSDMD alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.