Plasmide CRISPR/Cas9 KO GSDMDC1 (r): sc-437380

Présentation

Le gène GSDMDC1 du rat code une protéine contenant un domaine gasdermine, associée au remodelage membranaire et à des programmes de mort cellulaire régulée, des processus qui façonnent la signalisation immunitaire innée et l’homéostasie tissulaire. Les membres de la famille des gasdermines se situent généralement en aval de cascades de protéases inflammatoires et peuvent influencer la formation de pores, les flux ioniques et la libération de médiateurs inflammatoires, croisant ainsi des voies telles que la signalisation de l’inflammasome et la cytotoxicité induite par le stress. Bien que GSDMDC1 soit moins caractérisée que les gasdermines canoniques, son architecture en domaines suggère des rôles dans l’intégrité épithéliale et les réponses aux lésions. La dérégulation des voies associées aux gasdermines a été reliée à des phénotypes inflammatoires et dégénératifs, faisant de GSDMDC1 une cible utile pour des études mécanistiques dans des modèles de rat pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GSDMDC1 (r) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène dans les lignées cellulaires rat. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du , ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GSDMDC1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en pour l'étude de la signalisation de GSDMDC1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de essentiels à la fonction de GSDMDC1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GSDMDC1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (r) et le GSDMDC1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (r2) ciblent des sites distincts au sein du locus . Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GSDMDC1 plasmide HDR (r) et le GSDMDC1 (r2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.