Plasmide CRISPR d'Activation (h) GSC: sc-404148-ACT

Le gène humain GSC (goosecoid homeobox) code un facteur de transcription à homéodomaine qui régule la mise en place des patrons embryonnaires précoces et la spécification du mésendoderme en contrôlant des programmes d’expression génique liés aux décisions de destinée cellulaire et à la morphogenèse tissulaire. GSC participe à des réseaux transcriptionnels du développement qui s’intègrent à des voies de signalisation telles que TGF-β/SMAD et WNT/β-caténine, influençant la transition épithélio-mésenchymateuse, la migration et les états de différenciation. Une expression dérégulée de GSC a été associée à des altérations de la régulation des gènes du développement et a été étudiée dans des contextes incluant la plasticité des cellules tumorales et des phénotypes invasifs, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du contrôle transcriptionnel de l’identité de lignée. En tant que protéine nucléaire se liant à l’ADN, GSC est couramment utilisé comme marqueur et régulateur dans des modèles de développement précoce, de différenciation des cellules souches et de reprogrammation transcriptionnelle associée à l’EMT.

GSC Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GSC sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GSC Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GSC dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GSC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GSC. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GSC natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GSC au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GSC dans les cellules tumorales présentant une expression de GSC silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.